大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)蛋白的原理和自誘導(dǎo)的新產(chǎn)品

誘導(dǎo)表達(dá)原理：

將外源基因克隆在含有Lac啟動(dòng)子的表達(dá)載體中，讓其在大腸桿菌中表達(dá)。先讓宿主菌生長(zhǎng)，LacI產(chǎn)生的阻遏蛋白與Lac操縱基因結(jié)合，從而不能進(jìn)行外源基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，此時(shí)宿主菌正常生長(zhǎng)。然后向培養(yǎng)基中加入Lac操縱子的誘導(dǎo)物IPTG，阻遏蛋白不能與操縱基因結(jié)合，則外源基因大量轉(zhuǎn)錄并高效表達(dá)。

①Z、Y、A是指結(jié)構(gòu)基因，用于表達(dá)性狀；

lacZ編碼β-半乳糖苷酶，它可以切斷乳糖的半乳糖苷鍵，而產(chǎn)生半乳糖和葡萄糖；

lacY編碼β-半乳糖苷透性酶，它構(gòu)成轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，將半乳糖苷運(yùn)入到細(xì)胞中；

lacA編碼β-半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶，只將乙酰-輔酶A上的乙酰基轉(zhuǎn)移到β-半乳糖苷上；

②I是指調(diào)節(jié)基因，調(diào)節(jié)分泌阻遏物或誘導(dǎo)物；

③O是指操縱基因，與阻遏蛋白的結(jié)合部位；

④P是指啟動(dòng)子，啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。

乳糖操縱子是參與乳糖分解的一個(gè)基因群，由乳糖系統(tǒng)的阻遏物和操縱序列組成，使得一組與乳糖代謝相關(guān)的基因受到同步的調(diào)控。1961年雅各布（F．Jacob）和莫諾德（J．Monod）根據(jù)對(duì)該系統(tǒng)的研究而提出了著名的操縱子學(xué)說(shuō)。在大腸桿菌的乳糖系統(tǒng)操縱子中，β-半乳糖苷酶，半乳糖苷滲透酶，半乳糖苷轉(zhuǎn)酰酶的結(jié)構(gòu)基因以L(fǎng)acZ（z）， Lac Y（y），Lac A（a）的順序分別排列在質(zhì)粒上，在z的上游有操縱序列Lac O（o），更前面有啟動(dòng)子Lac P（p），這就是操縱子（乳糖操縱子）的結(jié)構(gòu)模式。編碼乳糖操縱系統(tǒng)中阻遏物的調(diào)節(jié)基因Lac I（i）位于和p上游的鄰近位置。

當(dāng)使用自誘導(dǎo)培養(yǎng)基時(shí)，傳統(tǒng)這種使用IPTG，檢測(cè)OD600的過(guò)程都可以省略。靶點(diǎn)科技現(xiàn)貨自誘導(dǎo)培養(yǎng)基，此外，產(chǎn)量更高。但是對(duì)于包涵體的問(wèn)題，需要優(yōu)化。